研究人员用冷冻替代固定条件下只用鞣酸(tannic acid)与醋酸铀联合的低温脱水固定，避免使用巯基氧化剂和醛固定剂，实现保证细胞超微结构下高效合成纳米金颗粒，且不再受标记蛋白折叠状态限制。

经试验测试证明，该方案已经高度成熟有效，重复率极高，可以广泛推广使用。“这也意味着终于全面攻克了在保证细胞超微结构前提下如何在标记蛋白上高效合成纳米金颗粒的难题。”何万中说。

图：新型可克隆电镜标记技术的实现

“做真正原创技术”

令研究人员感到欣喜的还有，他们开发的基于自成核抑制机制在富含半胱氨酸标记蛋白上合成纳米金颗粒技术，合成条件比较温和，接近生理条件，可用来开发一系列新型单分子探针。

例如，他们利用大肠杆菌表达纯化的绿色荧光蛋白纳米抗体(GBP) 与 MT标记的融合蛋白GBP-MT， 可成功免疫标记细胞中表达的绿色荧光标记蛋白，这显示出该技术可广泛用来标记目前已有绿色荧光蛋白标记的各种细胞及动物组织。

此外，在其他通用抗体、冷冻电镜分子标记等也具备应用潜力。

论文3位审稿人均对该研究给予高度评价。“该技术是对前人提出的基因编码电镜标记概念的深入探索与实现……总体看，我认为这项工作会非常有用”“该研究有望成为电子显微学领域里程碑式的论文”“我认为这项工作是细胞生物学研究方法的重大进展”。

何万中感到收获的喜悦的同时，他坦承，这场“大冒险”很“折腾”，需要超长的耐力，需要不断探索积累直至灵感闪现的时刻。

尽管中途有很多次发文章的机会，但他们都决心沉下心，一定要把问题研究透彻，直到真正创造出可在未来几十年甚至更长时间里被广泛应用的新技术。

“从发论文效率上来看，我是个失败者；但从真正创新意义上来说，我是成功的。”何万中同时指出，“此项马拉松式的原创研究工作的成功，离不开北京生命科学研究所这种特殊资助体制，以及王晓东所长对原创工作的充分理解和坚定支持。”

接下来，他希望进一步优化技术，从单分子标记拓展到两个、三个甚至更多目标分子的同时标记；通过一些设计，提高分子的表达量，开发适应各种条件的、对目标分子影响更小的标记技术等，让该技术获得国际同行的广泛应用。（韩扬眉）